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ForteBio實驗方案
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T細胞活化
抗原和共刺激信號對幼稚 T 細胞的激活啟動了 CD4+ 輔助和 CD8+ 細胞毒性 T 細胞的克隆擴增。除了 T 細胞增殖外，多種信號通路被激活，導(dǎo)致功能性細胞表面標志物的表達和細胞因子的釋放。
專注于利用免疫系統(tǒng)靶向癌癥的療法（雙特異性、檢查點抑制劑抗體和 CAR-T 細胞）市場正在不斷增長。監(jiān)測和量化激活曲線的能力有助于更好地了解 T 細胞如何對某些刺激作出反應(yīng)，進而可以深入了解藥物能夠如何利用免疫系統(tǒng)的力量。
分析概念
在單個孔中測量 T 細胞活化、增殖和細胞因子釋放的多重方法。
圖 1. 人類 T 細胞激活試劑盒檢測原理說明。針對 3 種激活標志物的表達分析了不同的 T 細胞表型：CD69（早期）、CD25（晚期）和 HLA-DR（甚至更晚）。2 種效應(yīng)細胞因子（IFNγ 和 TNFα）也使用 2-plex Qbeads 在同一孔中以夾心免疫測定形式進行量化?？梢酝瑫r測量 T 細胞增殖或編碼的靶細胞，但不包括在此插圖中。
主要優(yōu)勢
在生理相關(guān)模型中獲得對 T 細胞活化狀態(tài)的更多生物學(xué)見解
同時量化表面蛋白和細胞因子的表達
易于使用和解釋；預(yù)定義的門控策略
最少的樣品操作：小體積、一次洗滌、無需稀釋、混合和讀取
圖 2. 激酶抑制劑篩選突出了人類 T 細胞激活曲線的變化。
PBMC 用一組激酶抑制劑 (20 µM) 處理一小時。然后添加 CD3/CD28 Dynabeads 以刺激激活 24 小時。使用 T 細胞激活細胞和細胞因子分析試劑盒和 iQue 系統(tǒng)分析 10 µL 樣品。
(A) CD4+CD69+ 門控策略的板視圖。綠色框標識僅媒體控件。紅框標識環(huán)孢菌素對照。黃色框標識圖 BD 上顯示的化合物（1：魯索替尼；2：雙吲哚基馬來酰亞胺 I；3：AZD 7762）。
(B, C) CD4+ 和 CD8+ 細胞上 CD69、CD25 和 HLA-DR 的表達。
(D)從 PBMC 釋放 IFNγ 和 TNFα 細胞因子。
同時量化表面蛋白和細胞因子的表達
圖 3. 量化從不同供體分離的 PBMC 的激活曲線和細胞因子釋放的變異性。
SKOV-3 細胞與來自 3 個供體的 PBMC（10K/孔）在共培養(yǎng)試驗中接種（4K/孔）。激活由 CD3/CD28 Dynabeads 誘導(dǎo)。4 天后按照貼壁細胞提升方案提升細胞，并使用 T 細胞激活細胞和細胞因子分析試劑盒進行分析。(AC)早期 (CD69)、晚期 (CD25) 甚至晚期 (HLA-DR) T 細胞活化標志物的表達。(D)每個供體釋放 IFNγ。
最少的樣品操作：小體積，一次洗滌，無需稀釋
將細胞和上清液作為一個樣本的簡單協(xié)議，可簡化工作流程。
無需標記或補償優(yōu)化步驟。
對于高級流式細胞術(shù)，細胞表型分析和細胞因子檢測如何在同一個孔中工作？
iQue ® 人類 T 細胞激活試劑盒使用多重方法同時進行激活的 T 細胞免疫表型分析和細胞因子檢測。該試劑盒提供了用于鑒定活化 T 細胞的適當(dāng)抗體，以及 用于檢測和定量分泌的 IFNg 和 TNFa 的iQue Qbeads ® 。將兩種組分與活性染料一起添加到每個測定孔中，并與細胞和上清液樣品混合物一起孵育。然后預(yù)設(shè)門控策略將熒光信號從細胞和珠子中分離出來，并自動填充隨附的模板，以表達 T 細胞群和細胞因子濃度的數(shù)據(jù)。
我想在幾天內(nèi)測量 T 細胞活化 (TCA)，我需要在不同的板中設(shè)置幾個不同的測定嗎？這會殺死細胞嗎？
iQue ® 人類 T 細胞激活試劑盒允許在一個時間過程中使用單個測定板進行多次測量。使用 T 細胞激活試劑盒進行分析只需要少量 (10 µL) 細胞和上清液樣本，這意味著一旦采集了每個樣本（在通風(fēng)柜中無菌），檢測板就可以放回培養(yǎng)箱中準備好你的時間過程中的下一個樣本。在取樣之前，建議輕輕研磨內(nèi)容物以確保取樣均勻，但這不會影響細胞，也不會影響小樣本量。
在 T 細胞激活測定中，對多重 3 種或更多細胞因子檢測是否有任何限制？我可以在此測定中測量其他細胞因子和標志物嗎？
iQue ® 人類 T 細胞激活試劑盒可與 iQue ® 人類 T 細胞配套試劑盒結(jié)合使用，除了已包含在 T 細胞激活試劑盒中的細胞因子外，還可以測量多達 6 種人類細胞因子。Sartorius 還提供一系列細胞因子和趨化因子檢測 iQue Qbeads ® ，以便客戶可以制作自己的附加面板，以與 T 細胞激活試劑盒進行多路復(fù)用。單個 10 µL 樣品可用于分析多達 30 種分泌蛋白，客戶可以從 50 多種分析物中選擇進行定量。而且，如果您的特定分析物不在我們當(dāng)前的產(chǎn)品組合中，iQue Qbead ® Devscreen 試劑允許您靈活地連接您自己的捕獲抗體或目標蛋白，以獲得更加定制的個性化解決方案。
iQue 試劑盒提供了一個集成的解決方案，使高含量，高通量，流式細胞術(shù)為基礎(chǔ)的分析洞察復(fù)雜的生物學(xué)。IQueReagent 試劑盒已經(jīng)開發(fā)出來，可以在 iQueAdvanced 流式細胞術(shù)平臺上運行，并使用 iQueFozet 軟件進行分析。
生物洞察力: 多參數(shù)數(shù)據(jù)提供了一個更全面的了解細胞群體更知情的結(jié)果。速度: 在5分鐘內(nèi)分析一個96孔板或者在20分鐘內(nèi)分析一個384孔板可以得到更快的結(jié)果。易于使用: 簡化了工作流程，利用單一平臺的測定和數(shù)據(jù)分析與 iQueFogret 消除了從多個來源獲取和關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)所需的時間。小型化測定體積: 使用少至5μL，保存珍貴的樣品和試劑用于額外的分析
IQueQ 珠和 iQueQPanel 試劑盒允許您捕獲和分析不同珠型上的特定蛋白質(zhì)，用于分泌的細胞因子，粘附分子，酶，生長因子受體等的多重定量。 iQueReagent 試劑盒能夠測量多功能讀數(shù)，包括細胞周期，細胞凋亡，膜完整性，增殖和抗體表征，以及珠，細胞或兩者上的多種免疫細胞功能，允許您同時評估表型和功能。
抗體發(fā)現(xiàn)和開發(fā)通過在整個過程中復(fù)合抗體結(jié)合、功能和效價來提高數(shù)據(jù)吞吐量和質(zhì)量。- 抗體篩選-功能分析-細胞系發(fā)展過繼性細胞療法更快地評估多種細胞參數(shù)，減少細胞和試劑。- 免疫細胞殺傷-免疫細胞評估-細胞因子分析-小分子篩選-在整個藥物發(fā)現(xiàn)過程中對免疫生物學(xué)進行高含量的表型篩選。- 初級免疫細胞篩選-免疫功能-作用機制
可配置以滿足您的需要ーー從我們的菜單中復(fù)制多達30個分析物，并使用預(yù)配置的分析模板細胞因子分析、藥物篩選和生物標志物發(fā)現(xiàn)4iQuadesDevscreen 試劑盒3附加您自己的目標蛋白或捕獲抗體以獲得最大的靈活性 Plex 多達30個您自己的分析物與 iQuadesDevscreen SH,或5個分析用 iQue珠 Devscreen SAvCytokine 分析，表型篩選和抗體篩選4iQueQpanel HumanT Helper Kit 1Quantify 多達9個分析物在單個樣品中易于使用，具有預(yù)先配置的預(yù)混合試劑 sCytokine 分析,和分析 T 輔助細胞分泌的細胞因子5ique 免疫細胞和基于珠子的試劑盒1評估免疫表型和功能在一個單一的測試中 T 細胞角色塑造和免疫細胞殺傷試劑盒測量免疫表型標記，細胞健康，細胞功能和細胞因子分析標記在一個單一的井高度可重復(fù)，簡化工作流程與最小的動手時間細胞因子分析，T 細胞生物學(xué)，免疫分型，免疫細胞殺傷和角色塑造
iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑快速分析和比較大組抗體并表征其關(guān)鍵屬性(例如抗體內(nèi)化)的能力可以大大減少候選產(chǎn)生所需的定時器并加速潛在治療治療的開發(fā)。iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑是免洗 pH 敏感染料，以簡單的基于模板的格式從20μL 樣品中鑒定抗體內(nèi)化。小鼠和人類的類型被設(shè)計用于包含小鼠或人類 Fc 區(qū)域的抗體。該測定方法具有靈活性，可以將其他經(jīng)過驗證的試劑組合起來用于具有高通量能力的多重，無洗滌方案。 iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑盒 iQue 人和小鼠抗體內(nèi)化試劑盒是高通量，多重，無洗滌測定法，測量抗體內(nèi)化，抗體特異性和來自單個，30μL 測定體積的細胞健康?？贵w很容易用 pH 敏感的抗體內(nèi)化試劑(R/Red)標記。細胞活力也測量在同一測定使用細胞膜完整性染料(B/綠色) ，以評估一般細胞健康和抗體功能。使用相同的樣品，細胞特異性可以通過包含的 iQue 細胞增殖和編碼染料 V/Blue (Tag-it VioletTM)來表征。
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