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    anatrace物理性質(zhì)

    發(fā)布時(shí)間: 2024-01-08  點(diǎn)擊次數(shù): 1465次

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    聚合編號(hào)

    膠束的另一個(gè)物理性質(zhì)是聚集數(shù);

    存在于膠束內(nèi)的洗滌劑單體的數(shù)量(12530

    用于生化應(yīng)用的大多數(shù)洗滌劑都具有聚集性

    50100之間的數(shù)字(8)有些膽汁是例外

    酸衍生物,如CHAPSCHAPSOBig CHAP,具有

    10種洗滌劑的總數(shù)

    聚集數(shù)往往形成更多的球形膠束,而

    聚集數(shù)較大的洗滌劑往往形成橢圓體

    膠束通常,聚集數(shù)隨著長(zhǎng)度的增加而增加

    碳?xì)浠衔镦湹脑黾泳奂瘮?shù)往往

    隨著親水基團(tuán)的大小增加而減小

    向洗滌劑中添加碳?xì)浠衔锖蜆O性化合物

    溶液(1)提高離子威懾物溶液的溫度-

    試劑也會(huì)導(dǎo)致聚集數(shù)量的增加Aggrega-

    離子數(shù)可以通過(guò)多種方法確定,包括

    光散射(43)、小角度中子散射(44)和熒光

    染料結(jié)合(45

    了解洗滌劑CMC和聚集數(shù),一個(gè)

    可以確定幾個(gè)重要的參數(shù),包括concen-

    溶液中膠束的過(guò)濾和聚集分子

    膠束的重量在理想的無(wú)蛋白質(zhì)條件下,濃度-

    膠束的離子可以計(jì)算如下:

    [膠束]=[總洗滌劑]-[CMC]/ANiii

    其中CMC是臨界膠束濃度,并且

    AN是膠束聚集數(shù)

    無(wú)蛋白質(zhì)膠束的聚集分子量(AMW)可以

    計(jì)算如下:

    AMW=AN X單體分子量(iv

    其中AN是膠束聚集數(shù)

    典型的膠束聚集體分子量范圍為20-100kD

    6 8 0 0 .2 5 2 .1 2 8 0

    應(yīng)該注意的是,聚集體分子的測(cè)定

    蛋白質(zhì)-洗滌劑復(fù)合物的重量更為復(fù)雜

    本出版物后面的內(nèi)容參見(jiàn)“聚合分子量

    蛋白質(zhì)/洗滌劑復(fù)合物",第7頁(yè)

    清洗劑去除

    CMC在確定應(yīng)采用哪種方法時(shí)也很重要

    用于去除多余或不需要的洗滌劑洗滌劑可能會(huì)-

    fere與某些應(yīng)用程序配合使用,并且在重新配置時(shí)必須刪除-

    組成脂質(zhì)體(46,47)具有高CMC的洗滌劑很容易

    通過(guò)透析去除;洗滌劑溶液可以稀釋到低于

    CMC,使膠束分解成單體,可以很容易地

    隨著時(shí)間的推移通過(guò)透析管(7)通常,洗滌劑溶液-

    在大量過(guò)量(即200倍)的洗滌劑的作用下對(duì)離子進(jìn)行透析-

    幾天的免費(fèi)緩沖液,幾次更換無(wú)洗滌劑緩沖液

    在這段時(shí)間內(nèi),CMC低的洗滌劑通常通過(guò)

    對(duì)疏水性珠粒的吸附(48)洗滌劑結(jié)合珠??梢?/p>

    然后通過(guò)過(guò)濾或離心去除洗滌劑可以

    也可以通過(guò)各種類型的柱色譜凝膠去除

    過(guò)濾可用于將洗滌劑膠束與蛋白質(zhì)分離-

    基于尺寸差異的洗滌劑復(fù)合物和游離蛋白

    組酸也可以去除或更換洗滌劑-

    標(biāo)記的蛋白質(zhì)與鎳樹脂結(jié)合(7

    洗滌劑和生物膜

    生物膜是磷脂分子的雙層;這個(gè)

    雙層的總體結(jié)構(gòu)如下圖所示(圖5

    脂質(zhì)雙層的結(jié)構(gòu)

    5

    脂質(zhì)?;湹奈膊砍虮舜耍óa(chǎn)生

    非極性疏水核),而極性磷酸酯頭

    基團(tuán)與周圍的主體水相接觸。因此,雙層

    分為兩個(gè)不同的區(qū)域:疏水核心和

    親水性頭部區(qū)域每個(gè)“隔間"都有特的

    不同地影響駐留在

    雙層雙層的疏水核心,由磷組成-

    磷脂?;湥s30?厚,并提供

    疏水區(qū)溶劑化的低介電環(huán)境

    整體膜蛋白的(49,50)這個(gè)區(qū)域通常相當(dāng)

    生物相關(guān)溫度下的流體;雙層流動(dòng)性通常

    蛋白質(zhì)功能和蛋白質(zhì)橫向擴(kuò)散所必需的

    親水性頭群區(qū)域通常是極性的并且?guī)щ?/p>

    該區(qū)域通過(guò)哥倫布力與膜蛋白相互作用

    其穩(wěn)定額外的膜環(huán)并與極性

    α-螺旋末端(49,50

    生物膜相對(duì)于脂質(zhì)和

    蛋白質(zhì)例如,脂質(zhì)的組成不同

    紅細(xì)胞膜的小葉有助于

    這些細(xì)胞,允許它們通過(guò)脈管系統(tǒng)(外部

    小葉:76%磷脂酰堿(PC)、82%鞘磷脂(SP),

    20%磷脂酰乙醇胺(PE)、0%磷脂酰絲酸(PS);

    內(nèi)葉:24%PC,18%SP80%PE,100%PS百分比為o

    總脂質(zhì)含量)(51)此外,蛋白質(zhì)可能優(yōu)先

    位于膜的內(nèi)部或外部小葉上,以及

    在優(yōu)選的方向上,當(dāng)

    決定如何好地提取膜蛋白以及提取什么

    條件(即洗滌劑和/或脂質(zhì))適合重構(gòu)

    用于生物化學(xué)研究

    從膜中提取蛋白質(zhì)

    為了研究膜蛋白,必須首先從

    膜,并保持在可溶性、天然、功能性的形式

    在提取過(guò)程中,有人提出洗滌劑

    單體首先分配到雙層中

    洗滌劑與洗滌劑的協(xié)同作用破壞了雙層的穩(wěn)定性

    產(chǎn)生混合的脂質(zhì)洗滌劑片段(圖6A)終,

    進(jìn)一步添加洗滌劑會(huì)導(dǎo)致雙層溶解和蛋白質(zhì)

    增溶作用(圖6B)(8,52

    膜的溶解性

    6A

    6B

    膜蛋白可以有幾個(gè)“程度"

    從膜中提取用于進(jìn)一步研究蛋白質(zhì)可以

    以這樣的方式純化,使得一些天然脂質(zhì)保持與

    蛋白質(zhì)這可以通過(guò)使用不

    有效的脂質(zhì)增溶劑,并通過(guò)小化

    柱色譜期間的洗滌劑暴露或者,

    蛋白質(zhì)可以通過(guò)使用

    嚴(yán)格的清潔劑這在以下應(yīng)用中可能很重要

    需要均勻的蛋白質(zhì)制劑然后可以使用脂質(zhì)

    如果蛋白質(zhì)活性需要,添加回這些制劑中

    /或穩(wěn)定性

    應(yīng)該注意的是,研究

    特殊的膜微結(jié)構(gòu)域,稱為脂筏,存在

    一個(gè)特的問(wèn)題脂筏富含鞘脂,甘酸-

    氧化磷脂和膽醇(53-55)這些結(jié)構(gòu)域,也稱為

    抗洗滌劑膜(DRM)已被證明

    在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和蛋白質(zhì)分選中發(fā)揮關(guān)鍵作用歷上,DRM

    通過(guò)其對(duì)冷溶解的抵抗力進(jìn)行了檢測(cè)

    Triton X-100然而,已經(jīng)表明

    其中的DRM取決于其

    例如,Schuck等人表明

    DRMs相關(guān)的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的類型變化很大-

    當(dāng)使用不同的清潔劑來(lái)隔離膜時(shí)

    域(53)因此,在選擇

    從天然膜中分離蛋白質(zhì)的合適洗滌劑

    使用溶解的膜蛋白

    一些更常見(jiàn)的洗滌劑已被證明是

    在膜蛋白功能和結(jié)構(gòu)研究中有用的是

    烷基糖苷(56-58)例如,短鏈烷基麥芽糖苷和

    葡萄糖苷已成功地用于膜的結(jié)晶

    蛋白質(zhì)(59-63),而長(zhǎng)鏈糖苷(即十二烷基麥芽糖-

    side、十四烷基麥芽糖苷和十六烷基麥芽糖苷)

    顯示穩(wěn)定偶聯(lián)的G蛋白的各種寡聚狀態(tài)

    受體(GPCR),視紫紅質(zhì)(64)十二烷基麥芽糖苷,例如,具有

    被用于結(jié)晶膜蛋白細(xì)胞素c oxi-

    來(lái)自球形紅桿菌(65)的酶,以研究

    4-跨膜螺旋蛋白DsbB

    大腸桿菌(66),并研究光誘導(dǎo)的mam結(jié)構(gòu)變化-

    19F NMR測(cè)定馬里視紫紅質(zhì)(67

    在膜中使用越來(lái)越多的其他清潔劑

    蛋白質(zhì)生物化學(xué)是溶血磷脂、Fos堿等-

    試劑和短鏈磷脂(圖7

    磷脂類洗滌劑

    OOPO

    O

    O

    N

    O

    溶血磷脂酰堿

    P OO

    O

    O

    N

    Fos12

    二己酰磷脂酰堿

    7

    溶血磷脂與天然磷脂相似,其中

    膜蛋白被嵌入;它們有磷脂樣

    然而,頭群的疏水尾部只含有一個(gè)

    酰基鏈,它們形成水溶性聚集體事實(shí)上,有些

    GPCR在提取到溶血磷脂中后仍保持功能-

    細(xì)胞(68-70)溶血磷脂也被用于核磁共振結(jié)構(gòu)

    膜蛋白的研究以及在純化

    囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑(CFTR)(71,72As

    前面提到過(guò),Fos堿清潔劑已經(jīng)成功-

    短鏈NMR在膜蛋白研究中的成功應(yīng)用(14-16

    磷脂如二己酰磷脂酰堿(DHPC),

    已被用于溶解和重建整體膜

    蛋白質(zhì)這些化合物在溶液中形成水溶性膠束

    并已被證明能維持天然蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能-

    當(dāng)用于膜蛋白純化方案時(shí)(73,75)對(duì)于

    例如,大腸桿菌外膜蛋白XNMR結(jié)構(gòu)

    OmpX)在DHPC膠束中測(cè)定(76

    膜蛋白也可以重組成洗滌劑脂質(zhì)

    混合膠束這可能是具代表性的雙層-

    模擬系統(tǒng)例如,細(xì)菌視紫紅質(zhì)已經(jīng)被重新折疊

    進(jìn)入幾種不同的洗滌劑脂質(zhì)系統(tǒng),包括CHAPS/DMPC

    CHAPSO/SDS/DMPC膠束(7778

    實(shí)際考慮

    使用時(shí)需要考慮幾個(gè)實(shí)際問(wèn)題

    洗滌劑和膜蛋白首先,必須確定

    特定ap所需的洗滌劑純度和均勻度-

    例如當(dāng)純化和/或結(jié)晶蛋白質(zhì)時(shí),

    人們可以選擇既純又無(wú)污染的洗滌劑-

    氯化醇、酰胺或合成的其他副產(chǎn)物)和

    同質(zhì)的(即由單一物種組成)許多工業(yè)

    等級(jí)洗滌劑,包括TritonTween,可能是純的,但

    聚氧乙烯鏈組成的不均勻性

    這些洗滌劑可能不太適合用于結(jié)晶篩,但是

    可能足以提取蛋白質(zhì)

    其次,當(dāng)測(cè)定增溶劑的分子量時(shí)

    膜蛋白,必須考慮聚集分子

    洗滌劑蛋白復(fù)合物的重量(圖8)如果可以

    假設(shè)每個(gè)膠束有一個(gè)蛋白質(zhì)分子,如果

    蛋白質(zhì)比膠束小,則

    復(fù)合物等于蛋白質(zhì)分子量加上膠束

    聚集重量然而,較大的膜蛋白將傾向于

    與比存在于

    單獨(dú)的游離膠束在這種情況下,洗滌劑的濃度必須

    足以全覆蓋反式-

    膜結(jié)構(gòu)域

    蛋白質(zhì)/洗滌劑復(fù)合物的聚合分子量

    8

    同樣,重要的是要注意,當(dāng)一個(gè)人集中注意力時(shí)

    洗滌劑溶解蛋白質(zhì)的溶液,空的濃度

    膠束也可能隨著其分子量的增加而增加

    比集中器膜的分子量截?cái)嘀?span>Sev-

    有幾種方法可以測(cè)定so中洗滌劑的濃度-

    溶液包括比色測(cè)定法(79)、薄層色譜法(80),

    折射率測(cè)量(81),

    和分析超速離心(82,83)其中一些方法是

    可用于測(cè)定solu中游離洗滌劑的濃度-

    tion79-81)其他可用于測(cè)定蛋白質(zhì)的量-

    結(jié)合洗滌劑(7980,83)或蛋白質(zhì)-洗滌劑復(fù)合物的大小(81,83

    非洗滌劑表面活性劑和其他新型洗滌劑

    如前所述,膜蛋白可能不穩(wěn)定

    或被某些洗滌劑變性,包括離子洗滌劑和

    短鏈非離子洗滌劑半氟化表面活性劑(圖

    9A)和兩性(圖9B)是兩種非常不同的非洗滌劑

    用于膜蛋白研究的表面活性劑

     

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